产品货号:
JN0022
中文名称:
Bst DNA聚合酶大片段
英文名称:
Bst DNA Polymerase,Large Fragment
产品规格:
800U|4000U
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分,来源于E.coli菌株。利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。该酶具有5'→3'DNA聚合酶活性,但不具有5'→3'外切核酸酶活性。本制品可应用于DNA测序、DNA标记和等温DNA扩增等。
- 富含GC序列的DNA序列测定;
- 微量(纳克量)DNA模板的快速测序;
- 随机引物DNA标记;
- 双链DNA 5'突出端补平法标记;
- 可用于等温DNA扩增,如环介导等温扩增(LAMP),全基因组扩增(WGA),解旋酶恒温基因扩增(HDA)等。
- 链置换活性强。
- 高灵敏度。
- 最佳活性温度为65℃,恒温扩增,无需热循环仪。
65℃条件下,30分钟内使10nmol的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。
组分 | 800U | 4000U |
Bst DNA聚合酶大片段(8U/μL) | 100μL | 100μL×5 |
10×Bst LF Buffer | 1mL×2 | 1mL×10 |
dNTPs(10mM each) | 200μL | 200μL×5 |
保存:-20℃
50mM KCl,10mM Tris-HCl (pH7.5),1mM DTT,0.1mM EDTA,0.1% Triton X-100和50% Glycerol。
10×Bst LF Buffer:
200mM Tris-HCl,100mM (NH4)2SO4,500mM KCl,20mM MgSO4,1% Tween 20,pH8.8。
1×Bst LF Buffer,65℃温浴。
80℃加热10分钟。
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带,qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
- Bst DNA聚合酶不具有3'→5'外切酶活性;
- 长期贮存需加入100μg/mL BSA或0.1% Triton X-100;
- 建议反应温度不要超过70℃;
- Bst DNA聚合酶不能用于热循环测序或PCR。
成分 | 用量 |
10×Bst LF Buffer | 2.5μL |
F3/B3 | 0.2μM(终浓度) |
FIP/BIP | 0.8μM(终浓度) |
甜菜碱 | 1M(终浓度) |
dNTPs | 400μM(终浓度) |
M13 ssDNA模板 | 2μL |
Bst DNA聚合酶大片段(8U/μL) | 1μL(8U) |
ddH2O | 至25μL |
图1.Bst DNA聚合酶大片段用于LAMP实验,以M13 ssDNA为模板,以F3/B3,FIP/BIP为引物,65℃反应1小时后,进行琼脂糖凝胶电泳检测。
泳道M:1kb DNA Ladder;
泳道1:LAMP扩增产物。
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